ELISA检测试剂盒新手入门的使用技术报告

应客户们对年前产品预购的要求，今日开始逐渐安排发货，具体内容公司业务员会及时联系。新年的开始中，公司技术专员为ELISA检测试剂盒新手入门的使用技术报告做出一番整理，在这里分享给您，供参考。

◎ELISA方法原理
  1.双抗体(原)夹心法：检测抗原(体)的常见方法，应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原(适用于二价以上抗原，不能测 小分子半抗原)。
  2.间接法：检测抗体的方法，利用酶标记的抗抗体(第二抗体)检测已与固相抗原结合的抗体。
  3.竞争法：检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗原为例，使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。
◎操作注意
  ① 使用干净的塑料容器配置洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
  ② 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
  ③ 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
◎elisa试剂盒质控分析
  1.人员培训内容包括：①检验项目的基本原理(ELISA试剂盒原理)；②熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成，包被片段及其组成)；③熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识；④某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。
  2.基本了解
    ① 1971年Engvall等人把免疫组化的EIA技术应用于临床检验发展为ELISA试剂盒技术。
    ② 特点：ELISA试剂盒在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"。
    ③ 酶标记免疫活性物质，进行信号放大；
    ④ 有二步温育反应二次洗涤过程；
    ⑤ 灵敏度特异性相对较高。
    ⑥ 局限性：只能检测到ng水平
    ⑦ 精密度差(批内CV15-20%)；
    ⑧ ELISA检测试剂盒线性范围窄(一个数量级)；
    ⑨ 存在"HD-HOOK"效应。

ELISA试剂盒试验原理：

ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)。已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将已知浓度的标准品和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

ELISA试剂盒操作注意事项：

试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀释过后的标准品应丢弃，不可保存。

实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法：

 血清

操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g    离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

血浆

EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

细胞上清液

1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

组织匀浆

将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

保存

如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻