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动物血清论,恒远生物记详细知识资料

更新时间:2014-04-08 点击量:1613

    近这些天中,很多地区都是时时雨连天的,节后回来这新的一天中,上海恒远来跟朋友们讲动物血清论,恒远生物记详细知识资料。我们从其中的常规啊,处理啊等多方面来说明,下面我们就来看一看吧。
    我们知道的,血清通常作为补充成分添加在基础培养基内使用,能提供各种大分子蛋白,小分子量营养,水溶性成分的转运蛋白,和其它一些细胞在体外所必需的成分。可以结合或中和一些生长因子中的有毒成分,并提供培养基的缓冲能力。细胞培养时血清的添加依赖于基础培养基的化学组成,培养细胞的类型,及所用的培养系统。
    采集:胎牛血清采用妊娠3-9个月的小牛胎儿心脏穿刺的方法采集。马血清采自经细心饲养的供体畜群;新生牛血清采自出生10至14天的小牛。全部血清均按工业标准采集。
    处理:(全部血清)收集的血液均在冷藏条件下处理。血清和血块分离后立即将血清合并并冷冻。只有符合我们的检测标准的血清才被接受作进一步处理。
    热灭活血清:热灭活是在56℃水浴中严格控温30分钟。
    透析血清:用10,000截留分子量的透析膜在0.15M的NaCl中进行透析,直到葡萄糖水平低于5mg/dl(用邻甲苯胺测试法检验)。(伽马射线照射血清)可按客户要求对血清进行伽马射线照射。通过伽马射线照射以灭活各种动物血清中的病毒和支原体的方法已经得到证实。研究证实照射剂量在30-45kGy为宜。血清在此照射后物理化学特性和细胞培养表现没有变化。
    装瓶:粗血清须通过一系列的过滤才成为成品。zui后的过滤步骤包括使用0.2微米和0.1微米的无菌过滤。胎牛血清须通过三
次0.1微米过滤,其他血清须通过0.2微米过滤。
    质量控制:我们采取以下方法对每一批次的产品选取一定数量的样品进行质量控制分析。
检测:
1、化学检测:使用低温凝固点的方法检测渗透压,以保证符合产品规范。我们每天使用国家标准的技术研究所标定的标准溶液
对我们的渗透压检测仪器进行校准。同样每天使用国家标准技术研究所标定的标准溶液对pH计进行校准。使用电泳图谱鉴定血清的整体性质。样品被转移到硝酸纤维素基质中,并在缓冲体系内迁移。条带经染色、清洁、干燥后用密度仪进行扫描,以检测白蛋白和球蛋白组分的相对浓度。为证实是否在适当的条件下进行采血和处理, 使用修饰的Fleming方法对血红蛋白进行分光光度检测。
2、微生物学检测:所有血清使用Barile&Kern的大体积方法检测支原体。在推荐方法的检测范围内检测结果是准确的。样品至
少应该在肉汤中合并培养3个星期,同时要在琼脂平板上进行不少于4次传代培养。在有氧和厌氧(95%氮,5%C O 2)条件下,平板在36±2℃下孵育。在检测过程中,每周对琼脂平板进行一次微生物生长情况检验。使用Dienes染色法对怀疑被污染的琼脂平板进行支原体菌落的检测。然后,对平板进行再次镜检。对孵育肉汤瓶要定期进行浊度和pH值变动的检测。在推荐方法检测范围内,所有血清也要使用Hoechst荧光DNA染色法进行不可在肉汤中培养的支原体检测。
3、效能检测:对每一批次的胎牛血清,我们都进行下述培养效能检测。选择血清zui重要的标准是其支持特殊细胞的生长能力。因此,除了保证血清通过严格的品质控制,我们也同时在实验室条件下对血清的三个重要的培养效能进行检测:克隆效率、贴壁效果和二倍体成纤维细胞生长促进。克隆效率分析:克隆效率实验分析每一批胎牛血清促进小鼠骨髓瘤细胞及其衍生的杂交瘤细胞的克隆和生长能力。
血清的使用与储存:
    正确的使用及保存血清,才能使血清发挥应有的作用。
1、储存条件:血清一般储存于-20℃,同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后,首先要灭活处理,然后分装成小包装,储存于-20℃,使用前融化。融化时现置于4℃。融化后的血清在4℃不宜长时间存放,应尽快使用。
2、使用浓度:自从有了合成培养基,血清就是作为一种添加成分与合成培养基混合使用,使用浓度一般为5-20%,zui常用是10%。过多血清容易使培养中的细胞发生变化,特别是一些二倍体的无限细胞系,迅速生长之后容易发生恶性转化。
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