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免疫组化实验成功的关键

更新时间:2015-06-18 点击量:1918

*免疫组化实验成功的关键是抗体,如果抗体不好,整个实验就基本上不会成功。如何选择抗体成为免疫组化zui头疼的问题,因为一旦实验不成功将浪费我们辛苦收集来的样本,今天让上海恒远与您分享一下如何选择抗体这个问题!

1、一抗质量是酶免疫组化、免疫荧光和Western blotting等试验中的zui关键因素之一。从免疫组化选择抗体来说,质量的公司可能是Chemicon、upstate、Abcam、Dako公司等;从Western blotting选择抗体来说,信价比的可能是Abcam公司,一般都1ml,价格在2000元每株左右。而一抗订购中选择原则有1)选择单克隆还是多克隆抗体,前者特异性好,而后者灵敏度高;2)选择何种种属来源?一般兔来源的多是多克隆;而小鼠来源的多是单克隆,但也有另外。这也决定了你的二抗类型。3)检测何种种属的抗原,即species reactivity:Hu-human, Ms-mouse, Rat, Goat, Rb-rabbit, Shp-sheep等;这个很重要。4)抗体类型:IgG1/IgG2a/IgM?一旦一抗选为IgM,那么你二抗就必须是抗IgM;5)应用范围:WB, IP, IF, IHC(P), ELISA?一抗说明书中注明抗体可以应用于western blotting、免疫沉淀、免疫荧光、免疫组化(石蜡切片)、ELISA等等,这根据你实验目的抉择。6)抗体公司的选择,主要根据信价比的高低以及高质量文献数据支持。

2、二抗选择:一般有生物素标记、HRP标记和荧光素标记的二抗等多种。一抗种属选择好后,那么二抗只能是某种抗一抗种属来源的抗体,如果是酶免疫组化,则可以选择Bio-或HRP-标记,可以买不同公司单独的抗体,也可购买二抗染色试剂盒,包括二抗、SP等;而免疫荧光则可以选择荧光素标记的二抗,可以买美国Abcam公司等荧光素二抗,质量还不错。zui后,建议大家可能还是在排除方法、切片中抗原有无等前提下来客观、正确评价各种抗体的质量。

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