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如何选择免疫组化实验中所需要的二抗

更新时间:2015-07-01 点击量:2327

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。既然是抗体与抗原的反应,抗体就在实验中显得特别重要,如何选择抗体就显得很重要,今天上海恒远与您一起分享一下如何选择正确的二抗,进行免疫组化实验。
1 种属来源要匹配:根据所用一抗选定二抗。一般来说,如果一抗是小鼠源性,二抗应选择兔/山羊或其它种属抗小鼠的抗体。目前,美国Vector公司和 Zymed公司都有开发的用小鼠抗体检测小鼠组织的试剂盒,即一抗来源于小鼠,该试剂盒采用了通用非特异性封闭液和封闭内源性小鼠Ig的封闭液,可以 得到清晰的染色背景。

2.注意抗体同种型和亚型:确定一抗同种型和亚型后,可以选择抗一抗来源种属广谱Ig或针对一抗亚型的二抗。如一抗是小鼠IgG1,可以选用山羊抗小鼠的Ig或IgG1的二抗。

3.正确使用:也需要重新选择稀释比例。一般上海恒远会提供稀释比例从1:10稀释度始,作5倍比稀释。
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