上海恒远ELISA检测的重点方法小窍门

   本技术文章中，上海恒远生化试剂有限公司为您推荐两种ELISA检测的重点方法，分别是用于检测未知抗原的双抗体夹心法、用于检测未知抗体的间接法。欢迎您耐心阅读！
方法一：用于检测未知抗原的双抗体夹心法
1. 包被：用0.05M PH9.6 碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测O?D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O?D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
方法二：用于检测未知抗体的间接法
1. 用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml， 每孔加0.1ml，4℃放置一个晚上。次日洗涤3次。
2. 加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。
2. 同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体0.1ml， 37℃孵育30-60分钟，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。
4. 其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。
注意事项：
   正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。