人血管紧张素转化酶(ACE)酶联免疫试剂盒
l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人血管紧张素转化酶(ACE)的含量。
l 有效期:6个月
l 保存条件:2-8℃
l 本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人血管紧张素转化酶(ACE)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人血管紧张素转化酶(ACE)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
人血管紧张素转化酶(ACE)酶联免疫试剂盒需要但未提供的材料
1. 可在450nm处进行读数的酶标仪;
2. 能精确吸取10-200µL的移液器;
3. 可调多道(8)移液器(50-200µL);
4. 供可调多道移液器使用的试剂存放槽;
5. 洗瓶或洗板机;
6. 蒸馏水或去离子水;
7. 1升的圆柱形量筒;
8. 移液器:1和(10或25 mL);
9. 移液器枪头;
10. 纸巾;
11. 计时器,用以监控温育步骤;
12. 处理池和消毒剂(例如:0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水);
注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室
温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中
不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。 9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
保存: 贮藏于2-8°C。
标本收集
1. 本试剂盒可使用血清、血浆、细胞培养上清液、组织液标本。
2. 室温(20-25℃)下保存标本不要超过8小时。2-10℃保存标本,不超过48小时。如
耽搁的时间更长,请在-20℃或更低的温度下保存标本。标本避免多次冻融,这样可能会损失蛋白活性,产生错误结果。
准备工作
1. 浓缩洗涤液(20X)用双蒸水稀释成1X(至 500ml)。
操作步骤
试剂盒应平衡至室温(20-25°C )再试验。 取出所需反应板。
1. 加入10ul标准品(Standards)、10ul标本于相应反应板孔中。
2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。轻轻混匀30秒,封
住板孔,室温温育 45分钟。
3. 洗板:甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板(每孔内加入350ul洗涤液),并去除水滴
(在厚叠吸水纸上拍干);反复洗涤5次。
4. 每孔加入100ul显色液, 轻轻混匀10秒,室温温育20分钟。
5. 每孔加入100ul终止液(Stop Solution)。轻轻混匀30秒;30分钟内在450nm处读OD
值。
以OD值为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。根据样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。