TRH,小鼠促甲状腺素释放激素酶联免疫试剂盒
l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中小鼠促甲状腺素释放激素(TRH)的含量。
l 有效期:6个月
l 保存条件:2-8℃
l 本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠促甲状腺素释放激素(TRH)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠促甲状腺素释放激素(TRH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
TRH,小鼠促甲状腺素释放激素酶联免疫试剂盒的抑制性测定法操作步骤
本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体,经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b,而这次加入的抗体b于*次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的,但不是用同种动物免疫制备的,否则可出现非特异性反应。经孵育洗涤后,再加酶标记抗b抗体,再经孵育洗涤后加底物显色进行测定。这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。因此,放大的倍数更高,故比双抗体夹心法更加灵敏。同时避免标记特异性抗体,而另一优点是只要标记一种抗抗体,即可达到多种应用。
用于测定抗原的尚有第4种叫做抑制性测定法(见图),它是先用抗原包被固相载体,然后分为二组,一组加入用参考抗体和被检标本混合孵育后的混合溶液,假如标本中不含抗原,则参考抗体未被结合。因此它可以和包被于固相载体上的抗原结合。如标本中含有抗原,则抗原先与参考抗体结合,故参考抗体不再与包被于固相载体上的抗原结合。对加入酶结合物(抗球蛋白)和底物仅显示剩余结合的抗体量。再与另一组不加待检标本的参考系统比较,被检标本对底物显色的抑制程度与标本中所含抗原量成比例,二者之差,即为欲测抗原的量。
被检标本对底物显色的抑制程度与标本中所含抗原的量成比例,二者之差即为欲测抗原的量。
ELISA常用的几种方法
一、双抗体夹心法测定抗原
将抗原免疫*种动物获得的抗体吸附于固相表面;
加抗原,形成抗原-抗体复合物;
加抗原免疫第二种动物获得的抗体,形成抗体抗原抗体复合物;
加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体);
加底物。底物的降解量=抗原量。
二、直接法测定抗原
将抗原吸附在载体表面;
加酶标抗体,形成抗原—抗体复合物;
加底物。底物的降解量=抗原量。
三、间接法测定抗体
将抗原吸附于固相载体表面;
加抗体, 形成抗原-抗体复合物;
加酶标抗体;
加底物。 测定底物的降解量=抗体量。
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