酶联免疫试剂盒大部分人在做检测的时候，都不太注意ELISA试剂盒中检测操作步骤，内心感觉都知道，都懂的。但就是因为这种心理，所以造成有时候的检测结果出现失误和错误的结果。生物检测本就是个很严肃并且严谨的操作，因您的一个小小的疏忽和大意可能就会造成意想不到的错误。
正确的使用酶联免疫试剂盒的步骤：
1.在使用之前要将试剂充分的混合均匀，但是要注意在摇晃的时候不要产生过多的泡沫，从而造成有太多的空气进入试剂中，产生测试误差。
2.根据要检测样品的数量来确定的板条数。每个比对的样品和空白孔是做复孔，而样品的数量就可以自己视情况而定，不过能用复孔的还是用复孔。将标本液体1:1稀释后倒入50微升的反应孔中。
3.在反应孔中在加入50微升的待测样品，然后马上加入50微升的生物素标记抗体，盖上模板，轻轻摇晃使其混合均匀后，在37摄氏度的恒温下等待1小时。
4.将孔内液体甩去，加满洗涤液，震荡约30秒后，在甩去洗涤的液体，用纸将水吸干。这样子重复三次。再在没空加入80微升的亲和链酶素-HRP，同上混合均匀后，在37摄氏度的恒温环境下等待半小时。
5.同步骤四的洗涤方法。洗涤干净后，在没空中加入底物A,B各50微升，小心混合均匀，避免光照在37摄氏度下等待10分钟。
6.取出酶标板，迅速加入终止液50微升，测定结果。在450纳米的波长处检测各个孔的OD值。
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