ELISA试剂盒技术相关知识您知道吗？

    今天，上海恒远生物科技有限公司要与大家分享ELISA试剂盒技术的一些相关知识，希望能够帮助到大家。

一、实验原理：

结合在固相载体表面的抗原或抗体与受检标本（抗原或抗体）起反应。用洗涤的方法洗去未结合的抗原或抗体。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据呈色的深浅进行定性或定量分析。根据实际的应用方法，可以分成以下几种：

• 双抗夹心 ELISA：将捕获抗体包被在固相载体上，封闭后加入待检抗原，温育后加入酶标检测抗体，捕获抗体和检测抗体可以是针对不同表位的两种单抗，也可以是针对同一抗原的一种单抗与一种多抗，但是检测抗体需要经过酶标。

• 竞争ELISA：用待检抗原或抗体去干扰已经预先设计好的体系，zui终显色的结果与待检抗原或抗体的干扰程度成负相关。主要应用于只有一个抗原表位的蛋白检测。

• 多因子ELISA检测技术：多重ELISA芯片技术通过在96孔板的每个孔中以阵列的形式植入1~25种捕获抗体，随后像ELISA一样操作，通过化学发光(HRP酶)和荧光燃料(红外)来检测。

受刺激的细胞产生的细胞因子是短暂的，并且不同细胞因子基因表达的动力学是变化的。通过ELISA实验只能检测到的免疫反应性的细胞因子蛋白的含量，而这并不能*代表细胞因子的生物活性的水平。例如，使用抗细胞因子抗体的一种ELISA不能区别如TGF-β1的细胞因子蛋白是无活性的前体形式还是有活性的成熟蛋白。此外，一种ELISA可以检测部分降解的细胞因子蛋白，它们仍有免疫反应性（例如至少可识别两个表位），当时它可能却丧失了它们的生物学活性。

二、实验过程：

包被酶标版>封闭 >加样品孵育>洗涤 >加抗体孵育>洗涤 >加入酶底物>终止反应 >读数

三、ELISA操作要点：

1. 选择合适的固相载体；

2. 选择合适的包被缓冲液；

3. 确定*包被量；

4. 加样准确，避免产生气泡。

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