人抗血小板抗体IgG(PA-IgG)酶联免疫试剂盒代测
l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人抗血小板抗体IgG(PA-IgG)的含量。
l 有效期:6个月
l 保存条件:2-8℃
l 本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人抗血小板抗体IgG(PA-IgG)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗血小板抗体IgG(PA-IgG)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
人抗血小板抗体IgG(PA-IgG)酶联免疫试剂盒代测操作问题:
试剂准备不当可能影响酶联免疫吸附测定ELISA结果
在实验室,对试剂准备一般不太注意,通常的做法是,在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
因此,在ELISA测定中试剂的准备zui为关键的是,在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20min以上后,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。其次,目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制,因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。
此外,当试剂盒以OPD为底物时,则底物溶液应在反应显色前临时配制。
样品要求
·客户需提供待检测抗体和包被用抗原。
·检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆。
·样本收集后应立即-20℃保存,若长期保存应-70℃。
·样本量的要求:若一个指标做复孔检测应不少于250ul,做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足提供500ul以上。
·客户的样本收集后,立即按要求保存,切忌反复冻融。外地客户邮寄需要用干冰运输。邮寄前请与沟通确认。
回收率
elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L,则认为回收率为98%。
对于定量检测来说,主要还是一个准确度的验证。不过我看到别人写的内容比我自己想说的要好,所以就贴上去了。相对回收率可能会高于100%的,如果只是说“损失程度”,其实是不准确的。应该说,回收率越接近100%,说明这个试剂盒的准确度越高。
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